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Im Fernsehen tritt Heike Makatsch erstmals 1993 als Moderatorin des Musiksenders VIVA in Erscheinung. Über Umwege kommt sie zur Schauspielerei und gibt 1996 in Detlev Bucks "Männerpension" ihr Spielfilmdebüt. Buck engagiert die 1971 in Düsseldorf geborene Schauspielerin auch für "Liebe deine Nächste!" (1998). Es folgen Auftritte in dem von Kritik und Publikum gefeierten Kriegsmelodram "Aimée und Jaguar" (1997) sowie in "Gripsholm" (2000), in dem Makatsch die Freundin des Autors Kurt Tucholsky spielt.

Unter der Regie von Doris Dörrie steht sie in "Bin ich schön?" (1998) sowie im Kammerspiel "Nackt" (2002) vor der Kamera. Nach den internationalen Produktionen "Resident Evil" (2002) und "Tatsächlich ... Liebe" (2003) spielt sie im deutschen Fernsehfilm "Margarete Steiff" (2005) die Rolle der Titelgebenden Stofftier-Fabrikantin. Mit ihrer Verkörperung Hildegard Knefs in "Hilde" schlüpft sie 2009 ein weiteres Mal in die Rolle einer historischen Persönlichkeit.

Neben der Schauspielerei ist Makatsch auch sozial engagiert. Seit 2006 ist sie Botschafterin für die Entwicklungshilfsorganisation Oxfam. Darüber hinaus engagiert sie sich für die Kampagne Steuer gegen Armut, für die sie gemeinsam mit Jan Josef Liefers in einem Kurzfilm wirbt. Privat ist sie von 1996 bis 2004 mit dem britischen "James Bond"-Darsteller Daniel Craig liiert. Zeitweilig zieht Makatsch nach London. Heute ist sie mit Musiker Max Schröder zusammen, mit dem sie zwei Töchter hat.